TS2 Biot.: GG 1 Chapitre I : Extraction, purification et quantification des acides nucléiques 1. Extraction et purification d’ADN 1.1. Définitions L’extraction correspond à la sortie d’une espèce organique de la structure (solide : paroi cellulaire,...
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TS2 Biot.: GG 1 Chapitre I : Extraction, purification et quantification des acides nucléiques 1. Extraction et purification d’ADN 1.1. Définitions L’extraction correspond à la sortie d’une espèce organique de la structure (solide : paroi cellulaire, membrane cytoplasmique, membrane nucléaire) dans laquelle elle est emprisonnée et à sa mise en solution dans un solvant ou un tampon approprié ; Après élimination des parties solides on obtient un extrait brut. La purification correspond à l’élimination des impuretés donc des molécules autres que l’ADN voulu : - protéines - lipides - ARN L’ADN à extraire et purifier peut être de l’ADN chromosomique (procaryote ou eucaryote) ou de l’ADN plasmidique (principalement bactérien). 1.2. Principe Le principe de l’extraction et de la purification de l’ADN comprend 5 étapes constantes quelque soit la technique mise en œuvre : - lyse des enveloppes cellulaires - dissociation des protéines par dénaturation ou hydrolyse - élimination des protéines et de
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